克倫特羅檢測試劑盒采用間接競爭 ELISA 方法，在微孔條上預包被偶聯抗原，樣本中的殘留物克倫特羅將和微孔條上預包被的偶聯抗原競爭抗克倫特羅抗體，加入酶標記物后，用 TMB 底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物克倫特羅的含量成負相關，與標準曲線比較即可得出相應殘留物克倫特羅的含量。
克倫特羅檢測試劑盒的樣本前處理步驟：
一、樣本處理前須知
（a）實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。
?。╞）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結果。
u 樣本前處理需配制：
配液 1 0.1M HCl 溶液取 0.86ml 濃 HCl 加水定溶至 100ml。
配液 2 0.1M NaOH 溶液稱取 0.4g NaOH 加水定溶至 100ml。
配液 3 乙腈-0.1M HCl 溶液V 乙腈：VHCl =84：16。
二、樣本處理：
?。╝）尿樣本的處理方法
取 20?l 清亮尿樣直接測定（如果尿樣渾濁一定要過濾或 4000r/min 離心 10min，直至得到清亮尿樣），暫不使用的樣本應冷凍保存。 3、 在 ELISA 分析中的再現性，很大程度上取決于樣本稀釋倍數: 1 倍 洗板的*性，正確的洗板操作是 ELISA 測定
?。╞）組織樣本的處理方法一 程序中的要點。
1、稱 2±0.05g 均質后的組織至 50ml 離心管中，加 4、 所有恒溫孵育過程，避免光線照射，用蓋板膜入 6ml 去離子水，充分振蕩 2min，室溫 蓋住微孔板。
4000r/min 以上離心 10min(注：若組織樣本中油 u 操作步驟：
脂含量較高，可在振蕩后放入 85℃水浴 10min 1、從 2～8℃冷藏環境中取出所需試劑，室溫（20～后再離心)； 25℃）平衡 30min 以上，注意每種液體試劑使
2、取 20?l 上層液進行分析。 用前均須搖勻。
樣本稀釋倍數: 4 倍 2、取出框架及需要數量的微孔，將不用的微孔放
（c）組織樣本的處理方法二 入自封袋，保存于 2～8℃。
1、稱取 2 ± 0.05g 均質后的組織于 50ml 離心管 3、編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每中，加入 6ml 乙腈-0.1MHCl，振蕩 2min,室溫 個樣本和標準品做 2 孔平行，并記錄標準孔和
4000r/min 以上離心 10min； 樣本孔所在的位置。
2、取上清 3ml，加入 2ml 0.1M NaOH，加入 6ml 4、加標準品/樣本 20?l/孔到各自的微孔中，然后加乙酸乙酯，振蕩 1min，室溫 4000r/min 以上離 酶標記物 50?l/孔，再加入 80?l/孔的抗體工作心 10min。取全部上清于 50～60℃氮氣流或空 液，用蓋板膜蓋板，輕輕振蕩混勻，25℃環境氣流吹干； 反應 30min。
3、加入 1ml 去離子水溶解干燥后的殘留物，混合 5、將孔內液體甩干，用去離子水 250?l/孔洗板 4～30s； 5 次，每次間隔 15～30 秒，用吸水紙拍干（拍
4、取 20 ?l 用于分析。 干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
樣本稀釋倍數： 1 倍 6、顯色：加入底物 A 液 50?l/孔，再加入底物 B
（d）飼料處理方法 液 50?l/孔，輕輕振蕩混勻，25℃環境中避光顯
1、稱1.0±0.05g 研碎的飼料樣品于50ml 離心管中， 色 15min。
加入 10ml 甲醇，再加入 5g 無水硫酸鈉，充分 7、測定：加入終止液 50?l/孔，輕輕振蕩混勻，設振蕩 2min；15℃ 4000r/min 以上離心 10min； 定酶標儀于 450nm 處（建議用雙波長 450/630n
2、吸出離心后的上清液 1ml，于 50～60℃氮氣流 m 檢測，5min 內讀數），測定每孔 OD 值。或空氣流吹干，用 1 ml 去離子水溶解干燥后的 七、結果判定殘留物，再加入 1ml 正己烷混合 30s ；15℃ 結果判定有兩種方法，粗略判定可用第 1 種方4000r/min 以上離心 5min；去除上層有機相；
法，定量判定用第 2 種方法。注意樣本吸光度值與
3、取下層 20 ?l 用于分析。
其所含克倫特羅量成負相關。
樣本稀釋倍數：10 1、粗略判定。
