人瘧疾酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使用
目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關
液體樣本中瘧疾。
實驗原理：
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫法（ELISA）測定標本中人瘧疾。用純化的瘧疾抗體包
被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中瘧疾相結合，經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后
再與 HRP標記的瘧疾抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物
TMB顯色。TMB在 HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用
酶標儀在 450nm波長下測定吸光度（OD值），與 CUTOFF值相比較，從而判定標本中瘧疾
的存在與否。
操作步驟：
1.編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照 2孔、陽性對照 2孔、空白對照 1
孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先
加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不
觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
4.配液：將 30（48T的 20倍）倍濃縮洗滌液加蒸餾水至 600ml后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此
重復 5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同 3。
8.洗滌：操作同 5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A 50μl，再加入顯色劑 B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘
10.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止
液后 15分鐘以內進行。
結果判定：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00;陰性對照平均值≤0.10
臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品 OD值<臨界值（CUT OFF）者為人瘧疾陰性
陽性判定：樣品 OD值≥臨界值（CUT OFF）者為人瘧疾陽性
注意事項
1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物請避光保存。
6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為 630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為 2M的硫酸，使用時必須
注意安全。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
聯系電話：服務熱線：400-665-0203
聯系人：楊小姐
聯系傳真：QQ：847724139（微信同號）
聯系郵箱：yanjinbio@163.com
聯系地址：上海市北青公路6725弄6號2幢2層B區
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